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無(wú)血清細胞凍存液的制備方法是什么?

更新時(shí)間:2023-05-16   點(diǎn)擊次數:919次
  無(wú)血清細胞凍存液是一種常用的細胞保存方法,適用于多種類(lèi)型的細胞,并且可以長(cháng)期保存在低溫條件下。
 
  無(wú)血清細胞凍存液的制備步驟:
 
  1.準備培養基
 
  最好使用不含血清的培養基,以減少凍存液中可能存在的血清對細胞存活性的影響。使用無(wú)血清培養基時(shí)需要注意,必須添加適當的營(yíng)養物質(zhì)和生長(cháng)因子來(lái)維持細胞的生長(cháng)和代謝。
 
  2.細胞檢測
 
  檢查所需保存的細胞是否符合要求,如細胞的外觀(guān)、生長(cháng)狀態(tài)、染色體數目等。如果細胞有任何異常,就需要進(jìn)行處理或舍棄。
 
  3.細胞收集
 
  將細胞從培養皿中收集,可以通過(guò)倒置培養皿、利用細胞刮片或使用細胞收割機來(lái)完成。在收集細胞時(shí)需要注意避免損傷細胞膜。
 
  4.細胞計數
 
  使用細胞計數器或顯微鏡計數室對細胞數量進(jìn)行計數。確保細胞密度適當,通常建議細胞密度在200,000-500,000個(gè)/ml。
 
  5.細胞離心
 
  將細胞離心,去除培養基,并用一些無(wú)菌的生理鹽水或磷酸緩沖液洗滌細胞,以去除殘留培養基和細胞碎片。
 
  6.細胞懸液制備
 
  加入適量的凍存液(通常為含10%甘油和90%培養基的混合物)到細胞懸液中。混勻后分裝到無(wú)菌凍存管中,每支管放入1-2ml的細胞懸液。
 
  7.細胞冷凍
 
  將分裝好的細胞懸液放置于冰鹽混合物(-80℃)中快速冷凍,避免出現晶體形成。在冷凍過(guò)程中應該盡可能地減少對細胞的損傷。
 
  8.細胞儲存
 
  將已經(jīng)冷凍的細胞轉移到液氮罐中進(jìn)行長(cháng)期保存,避免溫度波動(dòng)和污染。每次需要使用時(shí),應該迅速將凍存管從液氮罐中取出并進(jìn)行解凍處理。
 
  總之,制備無(wú)血清細胞凍存液需要嚴格控制細胞密度、培養基組分和處理過(guò)程中的溫度等多個(gè)因素,以確保細胞能夠正常存活并長(cháng)期保存。

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