其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入被Alexa Fluor 488染料標志的dUTP，使凋亡的細胞被標志上綠色熒光，從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色，染色步驟簡(jiǎn)便，應用范圍廣泛，可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養細胞的凋亡情況。
包裝清單：

TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品組成：

保存條件：

-20 ℃保存，一年有效。

操作步驟：

1、樣本處理：

a) 石蠟切片：經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟，復水。脫蠟應充分。

b) 冰凍切片：流水沖洗，去除OCT包埋膠后，用純水洗3次。

c) 細胞飛片：用組織固定液固定后，用PBS洗三次，每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘，用PBS洗三次，每次5分鐘。

2、蛋白酶消化

將1ul 試劑（A）50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中，滴加到組織上，37℃孵育10-20分鐘。消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

3、陽(yáng)性對照組織的處理

將組織用DNase I消化，以獲得斷裂的DNA，即成Tunel染色陽(yáng)性的對照。陽(yáng)性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

將50 ul DNase I消化液滴加于組織上，37℃孵育10-30分鐘，消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

4、Tunel標志染色:

Tunel標志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過(guò)程中按下表配制Tunel染色工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后，直接滴加50ul Tunel染色液，37℃孵育1-2小時(shí)，染色結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

5、封片：

每組織上滴加一滴封劑，小心蓋上蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡。用吸水紙吸去多余的封片劑。熒光顯微鏡下觀(guān)察。

注意事項：

1、Proteinase K 消化時(shí)間需要摸索，冰凍切片 10 min 左右，石蠟切片時(shí)間應適當延長(cháng)。

2、陰性對照體系：配制Tunel染色工作液時(shí)用純水替代TdT Enzyme。

3、懸浮細胞用離心的方法收集細胞，所有反應在離心管中進(jìn)行，染色結束后，可在熒光顯微下觀(guān)察，也可以用流式細胞儀檢測。

4、Tunel標志染色時(shí)應注意避光。

5、實(shí)驗過(guò)程中請穿戴手套、實(shí)驗服等，做好個(gè)人防護。